?凝血因子是血漿與組織中直接參與凝血的物質(zhì)的統(tǒng)稱。其中已按國際命名法，用羅馬數(shù)字按發(fā)現(xiàn)的次序編號的凝固因子有12種（原13種，VI其實是活化后的第五因子而被取消）：凝血因子I，II，III，IV，V，VII，VIII，IX，X，XI，XII，XIII。此外，還有前激肽釋放酶、激肽釋放酶，以及來自血小板的磷脂等。因子XIII以后被發(fā)現(xiàn)的凝血因子，經(jīng)過多年驗證，認(rèn)為對于凝血功能，無決定性的影響，不再列入凝血因子的編號。因子VI事實上是活化的第五因子，已經(jīng)取消因子VI的命名。除了Ca²⁺和磷脂外，其余已知因子都是蛋白質(zhì)，多具有酶的特性，在血液中處于無活性狀態(tài)，以保持血液的液體性。只有被激活后才有凝血作用。通常于因子名稱后加“a”，以示其為活化狀態(tài)，如II→IIa。多數(shù)凝血因子在肝臟合成且需維生素K參與。九因子（凝血因子IX）的學(xué)名為凝血酶原復(fù)合物全名凍干人凝血酶原復(fù)合物，俗稱九因子，為人體血漿制品，主要用于治療乙型血友病。

離子交換色譜（IEC）因吸附量較大，被廣泛應(yīng)用于血漿蛋白的粗純工藝。但是離子交換色譜容易受到樣品中鹽濃度的影響，如果樣品溶液中含鹽，則除了過濾以外，還需要進(jìn)行脫鹽、透析等前處理。但是，近幾年市面上出現(xiàn)了一種不易受到鹽濃度影響的耐鹽型（salt-tolerant）離子交換填料，可以作為一種混合模式填料用于這類樣品的純化。

最近發(fā)表在期刊《Biotechnology Journal》上的一篇文獻(xiàn)中，研究人員使用了東曹的耐鹽型陽離子交換填料TOYOPEARL Sulfate-650F，從凝血酶原復(fù)合物濃縮液（PCC）中有效純化凝血因子IX（Factor?IX，九因子）。

M. Begi? et al., Salt-tolerant cation-exchanger containing sulfate groups as a viable alternative for mixed-mode type and heparin-base affinity resin, Biotechnol. J., 2021; 2100100, CC BY NC ND,?https://doi.org/10.1002/biot.202100100

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一、TOYOPEARL Sulfate-650F的簡介

1. 帶有硫酸根官能團(tuán)的陽離子交換填料

??官能團(tuán)為硫酸根(SO4-) ,與S-、SP-和CM-等類型相似，同為陽離子交換填料。

??對抗體等蛋白有很高的吸附載量。

2. 可有效去除抗體中的多聚體

??相較于其他陽離子交換填料，對多聚體有著更高的分離效果。

??在pH低于5.0、并含有0.15 mol/L的NaCl緩沖液中仍然可以結(jié)合抗體，具有耐鹽性。

??可作為Protein A層析的后續(xù)純化步驟。

3. 有類似于肝素親和填料的分離純化效果

??可以應(yīng)用于AT-III和其他相關(guān)蛋白的分離純化。

??有望應(yīng)用于病毒和疫苗的分離純化。

4. 適用的緩沖液pH范圍

??一般可以用于pH?4-12的緩沖液中。

??可以用pH?3-13的清洗液進(jìn)行短時間的CIP處理。

二、TOYOPEARL Sulfate-650F的基本參數(shù)

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出貨溶劑：含0.2mol/L醋酸鈉的20%乙醇溶液

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三、TOYOPEARL Sulfate-650F適用樣品

??單克隆抗體

??血漿蛋白、凝血因子

??病毒、VLP、疫苗

??重組蛋白

??堿性蛋白

四、TOYOPEARL Sulfate-650F的主要特點

??高載量

??多聚體分離

??耐鹽的陽離子交換填料

??與肝素親和作用相似（硫酸根官能團(tuán)）

五、TOYOPEARL Sulfate-650F的應(yīng)用條件

1. 單克隆抗體多聚體的分離純化

??對IgG可達(dá)到100 g/L的高載量。

??可以作為Protein A親和層析的后續(xù)純化步驟。

2. 在pH?5?以下具有耐鹽性

??在pH 4.7、0.15 mol/L NaCl的緩沖液中可以對樣品進(jìn)行吸附。

??在Protein A 親和層析或前處理后可以直接進(jìn)行上樣。

3. 硫酸根官能團(tuán)的特異性相互作用

??與肝素親和層析相似，可以與凝血因子、疫苗或病毒結(jié)合。

??可以用0-1 mol/L的NaCl進(jìn)行鹽梯度洗脫。

??與競爭對手的Sulfate填料具有類似的吸附性能，但是Sulfate-650F具有更高的吸附載量（某些填料由于孔徑小，所以蛋白只能結(jié)合在填料的表面）。

4. 常用的分離條件

??上樣緩沖液的pH要控制在5.5以下。

??優(yōu)化緩沖液的pH和鹽濃度能夠獲得更好的分離效果。

??當(dāng)緩沖液的pH為4.2時，即使在0.3mol/LNaCl的緩沖液中也能夠獲得很高的吸附載量。

六、凝血因子IX的純化實例

下圖是使用耐鹽型陽離子交換填料TOYOPEARL Sulfate-650F分離PCC中的維生素K依賴性凝血因子的結(jié)果。

首先，使用含有0.4 mol/L NaCl的高鹽濃度洗脫液，讓吸附較弱的凝血因子II、因子VII、因子X不被填料吸附直接流穿。然后，通過降低鹽濃度和提升pH的階梯梯度洗脫，把吸附在柱子上的因子IX洗脫下來。使用Sulfate-650F無需對樣品進(jìn)行脫鹽處理，即可獲得與使用肝素親和層析相同純度的因子IX。

七、TOYOPEARL Sulfate-650F在類似于肝素親和填料方面的應(yīng)用展望

1. 類似于肝素親和填料的分離純化作用*

??凝血因子：Factor VII、Factor IX、Factor X、凝血酶、AT-III

??組織纖溶酶原激活物(TPA）

??脂肪酶、核酸酶有關(guān)（如限制性內(nèi)切酶）、膠原酶、脂蛋白

2. 利用硫酸根官能團(tuán)的相互作用*

??病毒、疫苗

八、訂貨信息

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